摘要:
培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异,但从营养角度分析,培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外,培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。灭菌常用的方法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等。可根据不同的需求,采用不同的方法,如培养基灭菌一般采用湿热灭菌,空气则采用过滤除菌。
关键词:灭菌 方法 技术
在医学中微生物的杀灭叫灭菌;灭菌的结果是无菌,也就是说指定样品经过一系列处理后不含任何微生物。例如手术器械的消毒过程等。微生物的灭菌如果用加热方法与温度有关外还和作用时间有关。100度温度下加热30分左右时候基本上大部分微生物会被杀灭,但是细菌的芽孢却例外,能耐高温。
在医学实践中,常采用物理、化学及生物的方法,清除环境中的微生物,以切断传播途径,保护易感人群,从而控制或消灭传染病。现将有关术语介绍如下:
消毒 (disinfection) 杀灭物体上病原微生物的方法,称为消毒。用于消毒的化学药品称消毒剂。常用浓度下的消毒剂,只对细菌繁殖体有效,对其芽胞则需提高消毒剂浓度和延长作用时间才能杀灭。
灭菌 (sterilization) 杀灭物体上所有微生物,包括细菌芽胞的方法,称灭菌。
无菌 (asepsis) 物体中无活的微生物存在,称为无菌。防止微生物进入机体或物体的方法,称为无菌操作或无菌技术。进行微生物学实验、外科手术、换药、注射时,均需严格遵守无菌操作规定。
防腐 (antisepsis) 防止或抑制微生物在物体中生长繁殖的方法,称防腐。用于防腐的化学药品称防腐剂。使用同一种化学药品低浓度时为防腐剂,高浓度则为消毒剂。
卫生清理 (sanitation) 将微生物污染了的无生命物体表面还原为安全水平的处理过程。例如医院内的病房、病人使用过的用具、布类的卫生处理等。
一、物理消毒灭菌法
物理消毒灭菌法是医学实践中常用的方法,通常包括热力、紫外线、辐射、超声波和滤过除菌等。
(一)热力灭菌法
热灭菌法 利用高温使微生物细胞内的一切蛋白质变性,酶活性消失,致使细胞死亡。通常有干热、湿热和间歇加热灭菌等法。
热力能破坏微生物的蛋白质和核酸,使蛋白质变性凝固,核酸解链崩裂,从而导致其死亡。
1.干热灭菌法 直接利用火焰将微生物烧死(如烧接种环、载玻片和试管口等)。不能用火焰灭菌的物品则利用热空气灭菌,将物品放在烘箱中加热到160~170℃,持续90分钟,此法适用于玻璃、金属和木质的器皿。
(1)焚烧与烧灼 焚烧仅用于废弃的被病原微生物污染的物品、垃圾、人及动物尸体等。烧灼用于微生物实验室的接种环、金属器械、试管口、瓶口等的灭菌。
(2)干烤 使用干烤箱灭菌,一般需加热至160℃~170℃经2h,可达到灭菌的目的。适用于玻璃器皿、瓷器、金属物品等的灭菌。
2.湿热消毒灭菌法
湿热灭菌 以沸水、蒸气和蒸气加压灭菌。巴氏灭菌法就是湿热灭菌,此法有两种方式,①低温长时间处理:在61.7~62.8℃下处理30分钟;②高温短时间处理:在71.6℃或略高温度下处理15分钟。在上述诸法中,以蒸气加压灭菌效果好,可用常压蒸气灭菌,也可在高压蒸气锅中(一般使用1千克/厘米2)灭菌,其蒸气温度可达121℃,能将耐热的芽孢在30分钟内全部杀死。但对某些易被高压破坏的物质,如某些糖或有机含氮化合物,宜在0.6千克/厘米2压力下(110℃)灭菌15~30分钟。
(1)巴氏消毒法 法国学者巴斯德创用而得名。主要以较低温度杀灭病原菌或特定微生物,而使物品中不耐热成分不被破坏。此法有两种:一种方法是加热61.1℃~62.8℃、30min;另一种方法是加热71.7℃、15~30s。现在人们多用后种方法对牛奶进行消毒。
(2)煮沸法 煮沸100℃、5~10min,可杀死细菌繁殖体。芽胞则需要煮沸1~2h。常用于注射器、食具与饮水的消毒。
(3)流通蒸气法 用阿诺(Arnold)蒸锅或普通蒸笼,加热100℃、15~30min,可杀灭细菌的繁殖体。若将消毒后的物品放入37℃孵箱培养,使芽胞发育成繁殖体,次日再蒸一次,如此连续三次以上,可达到灭菌效果,这种方法称为间歇灭菌法。常用于不耐高温的物品,如糖类、血清和鸡蛋培养基等的灭菌。
(4)高压蒸气灭菌法 是一种迅速而有效的灭菌方法。使用高压蒸气灭菌器,利用加热产生蒸气,随着蒸气压力不断增加,温度随之升高,通常压力在103.4kPa(相当旧制的15磅/吋 2 或1.05kg/cm 2 )时,器内温度可达121.3℃,维持15~30min,可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。此法常用于一般培养基、生理盐水、手术器械及敷料等耐湿和耐高温物品的灭菌。
(二)紫外线与电离辐射
1.日光与紫外线 日光消毒是最简单、经济的方法,将病人的被褥、衣服、书报等在日光下曝晒数小时,可杀死表面的大部分微生物。日光中杀菌的成份主要是紫外线。紫外线200~300nm时,具有杀菌作用,其中以265~266nm波长的紫外线杀菌力最强。紫外线的杀菌原理,主要是细菌DNA吸收紫外线后,一条链上相邻的两个嘧啶通过共价键结合形成二聚体,从而干扰了DNA的正常碱基配对,导致细菌死亡或变异。紫红外线能透过石英,但不能穿过一般玻璃或薄纸,因此,紫外线只适用于物体表面及空气的消毒。例如手术室、婴儿室、传染病房、无菌制剂室、微生物接种室的空气消毒。
2.电离辐射 X射线、γ射线和阴极射线等电离辐射,有较高的能量与穿透力,因而可产生较强的致死效应。其机制在于产生游离基,破坏DNA。此法常用于大量一次性医用塑料制品的消毒;亦可用于中药成药和食品的消毒,而不破坏其化学成分和营养成分。
(三)超声波
超声波是不被人耳感受的高于 20千周/s的声波。其杀菌机制主要是它通过水时发生空化作用,而破坏了细菌细胞质的胶体状体,使其胞膜、胞质分离,胞壁及胞膜破碎致细菌繁殖体死亡。此法主要用于粉碎细胞,以提取细胞组分或制备抗原等。
(四)微波
是一种波长为 1mm到1m左右的电磁波,称微波。它能穿透玻璃、塑料薄膜与陶瓷等物质,但不能穿透金属表面。目前用于消毒的微波有2,450MHz与915MHz两种,常用于检验室用品、非金属器械、无菌病室的食品用具及其它用品的消毒。
(五)滤过除菌
滤过除菌是用滤菌器阻留过滤液体和气体的细菌,以达到无菌的目的。滤菌器含有微细小孔,只允许液体或气体通过,而大于孔径的细菌等颗粒不能通过。常用滤菌器有蔡氏滤器、玻璃滤器、薄膜滤器及高效颗粒空气滤器四种。主要用于不耐热的血清、抗毒素、生物药品以及空气等的除菌。
二、化学消毒法
许多化学药物都有抑制或杀灭微生物作用,按作用不同分为化学消毒剂和化学治疗剂两类,用于消毒、防腐和治疗疾病。
(一)常用消毒剂的种类和应用
具有杀死微生物的化学药物称消毒剂。消毒剂对人体有毒性作用,只能外用,不能内服。主要用于皮肤粘膜的伤口、器械、排泄物和周围环境的消毒。消毒剂在低浓度时也可作防腐用,但防腐剂的关键是应要对人体无毒性作用。消毒剂种类浓度与用途见表 13-1。
常用消毒剂的种类浓度与用途
类别 | 名称 | 浓度 | 用途 |
重金属盐类 | 红汞 | 2% | 皮肤粘膜的小创伤消毒 |
非金属 | 升汞 | 0.05%~0.1% | 器皿浸泡消毒 |
硝酸银 | 1% | 新生儿滴眼防淋球菌感染 | |
氧化剂 | 高锰酸钾 | 0.1% | 皮肤粘膜消毒 |
过氧化氢 | 3% | 皮肤粘膜创口消毒 | |
过氧乙酸 | 0.2%~0.5% | 塑料、玻璃器材消毒 | |
碘酒 | 2.0%~2.5% | 皮肤消毒 | |
氯 | 0.2ppm~0.5ppm | 饮水及游泳池消毒 | |
漂白粉 | 10%~20% | 地面、厕所与排泄物消毒 | |
醇类 | 乙醇 | 70%~75% | 皮肤、体温表消毒 |
酚类 | 石碳酸 | 3%~5% | 地面、器具表面的消毒 |
来苏 | 2% | 皮肤消毒 | |
醛类 | 甲醛 | 10% | 物品表面、空气消毒 |
戊二醛 | 2% | 精密仪器、内窥镜消毒 | |
表面活性剂 | 新洁尔灭 | 0.05%~0.1% | 皮肤粘膜、器械消毒 |
杜灭芬 | 0.05%~0.1% | 皮肤创伤冲洗、金属器械、塑料、橡皮类消毒 | |
染料 | 龙胆紫 | 2%~4% | 浅表创伤消毒 |
酸碱类 | 醋酸 | 500mml/100m 3 | 加等量水蒸发 空气消毒 |
食醋 | 2%溶液3~5ml/m 3 | 熏蒸消毒空气 | |
生石灰 |
加水 1:4或 1:8 |
配成糊状排泄物及地面消毒 |