验证方案的审批
项目（Items）   内容（Content）	姓名 （Name）	部门/职位（Dep./Post）	签名 （Signature）	日期 （Date）
起草人 （Prepared by）		QC
审核人 (Reviewed by)	梁召权	设备部
审核人 (Reviewed by)	柴景明	质量部
批准人 (Approved by)	于红梅	质量负责人

 
 
 
 

目 录
 
1 目的3
2 范围3 
3 概述3
4 验证类别5
5 验证前准备5
5.1验证人员及职责5
5.2验证引用文件的确认6
5.3仪器仪表校验的确认6
6 验证内容及合格标准7
6.1相关条件的确认7
6.2验证步骤8
6.3验证合格标准10
6.4数据统计及分析11
7 偏差分析11
8 变更处理11
9  验证结论及评价11
10 再验证周期11
11 文件修订12
12 附录及附表12
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
1目的
本验证是为了确认灭菌器的各种功能可以达到生产要求，设备能够在预定的操作范围之内稳定运行，其性能满足生产工艺的要求。
2范围
本验证范围是确认微生物实验室灭菌柜能够满足生理盐水、微生物检测用具等物品的灭菌要求，此次验证主要包括空载热分布测试、满载热分布测试、满载热穿透实验。
此验证方案计划于2014年1月17日-10月25日给予实施。
3 概述
3.1 设备描述

设备名称	压力蒸汽灭菌器	设备编号
制造商		灭菌容积		150L
安装地点		材质
设备结构描述	设备主要由主体、密封圈、灭菌筐、加热盘管几部分组成。
主要技术参数	最高工作压力		0.165MPa
	额定工作温度		125℃
	热均匀度		≤±1℃
	电源电压		220V50Hz
	电热管功率		4．5KW
工作原理描述	预热阶段：将水温升至100℃。 升温阶段：放入物品后继续加热，使柜内温度逐渐升高。 灭菌阶段：升温至设定值后，保持一定时间灭菌。 冷却阶段：排放内部蒸汽。 结束：当柜内压力达到安全压力时，工作结束。
主要用途	用于*******等物品的灭菌。

3.2灭菌程序描述

灭菌程序采用不低于121℃，30min。湿热灭菌程序包括以下阶段或步骤：
ü 通饱和蒸汽；
ü 加热；
ü 灭菌；
ü 冷却。
实现灭菌的三个重要条件分别是：温度，时间和饱和蒸汽。
典型的灭菌T~t曲线如下：
 

3.3验证方法学描述

3.4 D、Z、F0值
D值是微生物的耐热参数，是指在一定温度下将微生物杀灭90%，即使之下降一个对数单位所需的时间。D值越大，微生物耐热性越强。
Z值是灭菌温度系数，是指某一种微生物的D值变化一个对数单位，灭菌温度应升高或下降的度数。其描述的是微生物对温度变化的敏感程度，Z值越大，微生物对温度变化的敏感程度越弱；通常Z取10。
F0值为121℃下的标准灭菌时间。灭菌采用过度杀灭（Over Kill）的概念，即F0≥30。非121℃时的F0值按下公式进行计算：

：灭菌时间；
Z：灭菌温度系数，Z通常取10；
3.5工艺参数设定

项目	温度/运行时间
空载热分布测试	121℃/30min
满载热分布测试	121℃/30min
满载热穿透测试及微生物挑战测试	121℃/30min

4验证类别
再验证
5验证前准备
5.1验证人员及职责
5.1.1 QC
5.1.1.1负责起草、审核验证方案和报告；负责对参与验证的所有人员进行方案的培训，确定所有人员有能力实施本方案。
5.1.1.2按照验证方案执行验证，收集验证数据并分析、总结报告；
5.1.1.3负责记录验证执行过程中出现的所有偏差，对关键的偏差应调查，在偏差关闭之前不得执行随后的验证工作。
5.1.2质量部
5.1.2.1负责审核验证方案和报告；
5.1.2.2负责验证过程样品的检测。
5.1.2.3负责审核方案和验证报告；
5.1.2.4参与验证过程偏差的调查；
5.1.2.5负责验证技术支持；
5.1.2.6负责对环境进行监测；
5.1.3质量负责人
5.1.3.1负责批准验证方案和报告。
5.1.2验证小组成员及分工
 

姓名	部门	在本验证小组中担任的职务	岗位	职责
柴景明	质管部	组长		负责方案的起草，对验证方案进行培训并组织实施。
	质管部	组员	质微生物检验员	负责设备运行前各项目检查及设备运行的操作。
	质量部	组员		负责生物指示剂的培养检测。
王莹	质量部	组员		监督过程的实施，并负责取样

5.1.3人员资格审查及方案培训的确认
本验证小组所有成员在验证之前应接受相关的培训，如验证方案、设备操作SOP、安全注意事项等，并有记录。培训记录见附表1《人员培训记录》。

审查项目	审查方法	存放地点
人员培训档案	检查职工培训记录卡	职工档案
验证方案的培训记录	检查培训记录卡	验证报告

结论：
确认人/日期：                                     复核人/日期：
5.2验证引用文件的确认
5.2.1审查项目、审查方法、接受标准

审查项目	审查方法	接受标准
文件的审批	检查文件	文件经有资格的人员起草、审核和批准
文件的执行	检查文件	文件在执行期内

5.2.2验证引用文件的确认

序号	文件/资料名称	文件编码	执行日期	版本号
1	湿热灭菌标准操作规程
3	***灭菌标准操作规程
4	洁净服、洁净鞋灭菌标准操作规程
5	药品生产验证指南2003
6	验证管理标准

结论：
确认人/日期：                                    复核人/日期：
5.3仪器仪表校验的确认
5.3.1审查项目、审查方法、接受标准

审查项目	审查方法	接受标准
校验记录	仪器仪表校验记录及其校验合格证	仪器仪表都经过了校验，且都在校验期内、校验结果为合格。

仪器仪表校验的确认见附表2《仪器仪表校验记录》
结论：
确认人/日期：                                    复核人/日期：
6验证内容及合格标准
6.1相关条件的确认
6.1.1设备确认
6.1.1.1检查方法：确认设备安装位置及安装牢固性，各附件完整性，检查设备密封圈密封性能及灭菌器各接口处密封是否良好。
6.1.1.2接受标准：设备安装位置正确，安装牢固，各附件完整，密封圈密封性能及灭菌器各接口处密封良好，均符合技术参数要求和工艺要求。
6.1.1.3测试记录：见附表3《设备确认记录》。
结论：
确认人/日期：                                    复核人/日期：
6.1.2公用设施连接确认
6.1.2.1检查方法：检查灭菌柜是否连接电源、水源、管路开关等设施。
6.1.2.2接受标准：均已连接。
6.1.2.3测试记录：见附表4《公用设施连接检查记录》。
结论：
确认人/日期：                                    复核人/日期：
6.1.3清洗确认
6.1.3.1检查方法：要求用不脱落纤维的已清洁的抹布擦拭灭菌器内部。
6.1.3.2接受标准：清洁部位光亮，用洁净抹布擦拭无黑点等异物。
6.1.3.3测试记录：见原始记录《湿热灭菌器清洁记录》。
结论：
确认人/日期：                                    复核人/日期：
6.1.4水位检查。
6.1.4.1检查方法：查看灭菌器内水位是否在现位器以上，以确认灭菌柜使用的水源是否合格。
6.1.4.2可接受标准：水位在现位器以上。
结论：
确认人/日期：                                    复核人/日期：
6.1.5  生物指示剂确认
6.1.5.1可接受标准：指示剂在有效期内；每支指示剂含芽孢不少于1×106。
6.1.5.2确认记录

名称	生产批号	有效期至	含芽孢量	D值	生产厂家
嗜热脂肪芽孢 杆菌孢子生物指示剂（ATCC7953）

结论：
确认人/日期：                                    复核人/日期：
6.2验证步骤
6.2.1空载程序验证
6.2.1.1空载热分布测试
（1）将12支留点温度计入灭菌室内。
（2）一支留点温度计放在温度控制传感器旁，其于留点温度计均置于腔室各处（留点温度计分布见下图），留点温度计的测温点不得与金属其他表面接触。

探头分布整体透视图
其他分布点的具体位置如上图所示：
（3） 启动灭菌器 ，达到灭菌温度后，温度应不低于121℃，运行30min。
（4）灭菌结束降温后，取出温度计记录数据分析，如果符合空载热分布测试的标准，依照此操作程序进行其余两次测试。
（5）测试见附表7《空载热分布测试记录》。
结论：
确认人/日期：                                    复核人/日期：
6.2.1.2满载热分布测试
（1）最大装载量的确认:
装载方式：无菌服；（8件/包）；细布20块、****。

（2）满载热分布测试
A、在灭菌器中按最差装载方式放入****物品，把12支留点温度计按照热分布探头布局图（照片见附表16）所示放入室内。
B、启动灭菌器，达到灭菌温度后，温度应不低于121℃，运行30min。
C、灭菌结束降温后，取出温度计记录数据并分析，如果符合满载热分布测试的标准，依照此操作程序进行其余一次测试。
D见附表8《满载热分布测试记录》。
结论：
确认人/日期：                                    复核人/日期：
6.2.1.3热穿透实验
(1）打开灭菌器，按照指定的最差装载方式将被灭菌物品放置在腔室中，随后将12个温度计按预先确定的布点图，放置在被灭菌物品内部，同时每只温度计上放置一个生物指示剂，其中在最差装载条件下得出的冷点位置放置两个生物指示剂，上盖密封。
(2） 使用嗜热脂肪芽胞杆菌孢子生物指示剂Bacillus stearothermophilus。
(3）启动灭菌器，达到灭菌温度后，温度应不低于121℃，运行30min。
(4）灭菌结束，待冷却后，立即取出所有生物指示剂，进行微生物培养。
(5）分别在嗜热脂肪芽胞杆菌孢子生物指示剂培养基中培养，培养温度55-60℃，24h后、48h后及7天后记录指示剂变化情况，并记录，同时取一支未经处理的生物指示剂作为阳性对照。
(6）培养后的生物指示剂如有任何一支指示剂变黄，则表明有细菌生长，如果颜色没有变化，则表明灭菌有效。
(7）灭菌结束降温后，取出温度计记录数据并分析。
(8）见附表9-11《满载热穿透测试记录》、《生物指示剂测试记录》《生物指示剂孢子数量确认记录》。
结论：
 
确认人/日期： 
6.2.1.4灭菌后物品质无菌检查 
（1）测试程序：满载测试时，每次选取接近灭菌柜最冷点的物品两套。同时将上述三批物品放置至有效期（24小时）后，再进行一次无菌检查。
（2）检查方法
A、灭菌后检查：按照《洁净区微生物监测标准操作规程》对灭菌后的物品进行菌落检查。接触面积24～30cm2，迅速盖好盖，放入30～35℃倒置恒温培养72小时，同时取三个空白双碟做阴性对照，计菌落数，填写《物品菌落检测记录》。
B、有效期检查：将物品存放在**** 级下，放置24小时后取出，按照按照《洁净区微生物监测标准操作规程》进行检测，样品编号分别为（A24、、、、、、、、）。
C 标准：灭菌后及放置到有效期后的物品菌落数为0，检查合格率100%。空白培养基对照均无菌生长。
D、见附表12-13《物品菌落检测记录Ⅰ》、《物品菌落检测记录Ⅱ》
结论：
确认人/日期：                                    复核人/日期：
 
 
                                   复核人/日期：
6.3 验证合格标准

项目	温度/运行时间
保压实验	压力达到0.15MPa,保持15min，密封圈无泄漏。
连续三次空载热分布	温度计全部在121℃―123℃，灭菌时间≥30min，灭菌温度波动≤2℃，灭菌温度均匀性≤±1℃。
连续三次满载热分布	温度计全部在121℃―123℃，灭菌时间≥30min，灭菌温度波动≤2℃，灭菌温度均匀性≤±1℃。
连续三次满载热穿透实验及生物指示剂实验	各点温度均在121.1℃以上，灭菌时间≥30min，Fo值≥30min。 在55-60℃下嗜热脂肪芽胞杆菌孢子生物指示剂培养7天后，指示剂不变色，对照样在24h内，指示剂变黄色。
灭菌后物品无菌检查	灭菌后及放置到有效期后的物品菌落数为0，检查合格率100%。空白培养基对照均无菌生长。

 
6.4数据统计及分析
对验证结果进行数据统计分析确认脉动真空灭菌柜测试符合要求。
7偏差分析
对验证过程中所发生的偏差进行处理和分析，并制定纠正预防措施，必要时要重新进行验证。如有偏差，要完成偏差处理与分析报告表。见附表15。
在验证过程中如果出现个别项目的不合格情况，应该对不符合项进行偏差分析，找出原因进行整改。对不符合项重新确认。
在检测过程中如果出现检测项目不合格的情况，认真分析原因，如果属系统问题，进行整改，整改后重新验证。如果是取样或化验原因，重新取样对不合格的指标重新化验。
结论：
                                   评价人/日期：
8变更处理
本方案在实施过程中如发生变更，应将与变更有关的所有信息记录下来，并进行分析与评价，填写验证变更申请表。见附表16。
结论：
                                   评价人/日期：
9验证总结及评价
通过对灭菌器性能的检测结果进行数据分析总结，确认灭菌器及辅助系统的每一部分功能都能达到生产工艺要求，由验证小组组长对验证过程及结果进行综合评价，评价所要验证的内容是否已达到验证合格标准，验证结论是否有效。确定本次验证的结论。
结论
 
                                  
                     评价人/日期：
10再验证周期
灭菌器验证周期为1年；发生以下变更时，需要再验证：
（1）设备更换、改造或大修后；灭菌工艺发生改变；
（2）灭菌物品发生改变；
（3）灭菌物品装载形式、装载量发生变化。
 
11文件的修订
根据本方案实施过程中所发现的问题，对相应的SOP进行补充和完善，补充及完善的内容列入下表中。

文件编号	文件名称	修订内容

12附表及附录
附表清单

序号	编号	名称
1		培训确认表
2		仪表校验检查记录
3		设备确认记录
4		泄漏测试记录
5		空载热分布测试记录
6		满载热分布测试记录
7		满载热穿透测试记录
8		生物指示剂测试记录
9		生物指示剂孢子数量确认记录
10		物品菌落检测记录Ⅰ
11		物品菌落检测记录Ⅱ
12		偏差处理与分析报告
13		验证变更申请表

 
附表1培训确认表
培训确认表                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                           
编号：              版本号：00                           第1页共1页

主讲人			日期
培训 内容
参加人员：
确认内容
该验证所有参与成员均经过了培训且能胜任本次验证工作					□ 是       □ 否
备注：
确认人/日期

 
 
 
 
附表2 仪表校验检查记录
仪表校验检查记录
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仪表名称	型号	编号	有效期至	检查结果	检查人	检查日期
温度传感器
压力变送器
温度验证仪

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
附表3设备确认记录
 
设备确认记录
编号：                 版本号：00                    第1页共1页

检查项目	检查方法	检查结果	检查人	检查日期
设备型号	检查设备铭牌	是 □ 否 □
设备定位	检查灭菌器安装地点和位置，在***	是 □ 否 □
材质	该蒸汽灭菌柜，采用316L不锈钢材料制作，密封圈材料为硅橡胶	是 □ 否 □
外观	确认机器外观是否良好，无缺陷和损坏	是 □ 否 □
操作与维护	有足够的空间进行操作和维护	是 □ 否 □
加热形式	电加热	是 □ 否 □
加热功率	按说明书技术参数	是 □ 否 □
仪表型号	能满足工艺要求	是 □ 否 □
动力电源	三相四线、接地良好	是 □ 否 □

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
附表5泄漏测试记录
 
泄漏测试记录
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测试日期	开始时间 t1	开始压力 P1	结束时间 t2	结束压力 P2	泄漏率    P2- P1           t2 - t1
标准	泄漏率标准：保压15min,每分钟不得超过0.13Kpa
检查人/日期				复核人/日期